Demba Diallo Moudjahid. (1999). Optimisation d'un protocole d'extraction et de purification d'ADN de nodules de légumineuses.
Dakar : IRD, 48 p. multigr. Mém. DEA : Biol. Végétale, UCAD : Dakar. 1999/06/16.
Titre du document
Optimisation d'un protocole d'extraction et de purification d'ADN de nodules de légumineuses
Année de publication
1999
Type de document
Diplôme
Auteurs
Demba Diallo Moudjahid
Source
Dakar : IRD, 1999,
48 p. multigr.
Diplôme
Mém. DEA : Biol. Végétale, UCAD : Dakar. 1999/06/16.
L'optimisation de l'extraction et de la purification d'ADN de nodules de légumineuses a été réalisée en vue de PCR/RFLPs permettant la caractérisation rapide des souches de Rhizobium contenues dans ces nodules. Nous avons testé différents tampons d'extraction, notamment en faisant varier deux composants essentiels, le CTAB (CetylTriméthylAmmoniumBromide) et le PVPP (PolyVynil PolyPyrrolidone). Des méthodes standards de purification de l'ADN à base de phénol et de chloroforme ont été testées. Les conditions optimales d'extraction et de purification sont proposées, permettant l'obtention d'un ADN pur, de haut poids moléculaire, parfaitement amplifiable. Le protocole ainsi défini a été testé avec succès sur différents types et divers modes de conservation de nodules, recoltés sur différentes espèces de légumineuses : jeunes plantes de deux mois, plantes âgées de cinq à douze mois cultivées en conditions contrôlées et sur des arbres âgés d'environ trente ans en conditions naturelles. Une étude préliminaire de compétition entre huit souches de Rhizobium appartenant à des groupes taxonomiquement différents, inoculées à dix espèces de légumineuses, a permis de mettre en évidence la dominance de certaines de ces souches dans les conditions de l'expérimentation. L'application de la technique à des études de compétition entre souches est discutée dans ce mémoire. (Résumé d'auteur)
